ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理好像很簡樸，不過乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關(guān)閉。假定您的布景過高，懷疑關(guān)閉不充分，那么您可以檢驗(yàn)運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液，或恰當(dāng)延伸關(guān)閉時間。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有用阻撓許多不同類型的分子相互作用。另一個挑選是運(yùn)用蛋白和非離子型去污劑這兩種關(guān)閉液，ELISA試劑盒后者可幫助洗刷過程中的關(guān)閉。處理這個題目的一種方法是運(yùn)用雞或魚的正常血清。好的關(guān)閉液應(yīng)下降非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，咱們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于成果的信噪比。
假定您的ELISA試劑盒不幸地碰到了高布景，那么也無需太擔(dān)憂，依次檢查ELISA體系中的組分，并掃除可能存在的標(biāo)題。記住，非特異的抗體結(jié)合會添加布景。不過，它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。為了避免這一點(diǎn)，切勿運(yùn)用過多的一抗或二抗。
ELISA試劑盒假定布景過高，而您懷疑洗刷不行時，可以檢驗(yàn)添加洗刷次數(shù)。這種關(guān)閉液廉價、不亂，在去除洗刷過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。假定濃渡過高，ELISA試劑盒或許未準(zhǔn)確稀釋，則會導(dǎo)致高布景。常用的蛋白關(guān)閉液包括牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占有微孔板中埋伏的結(jié)合位點(diǎn)。
請勿運(yùn)用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會下降特異結(jié)合，發(fā)生假陰性。這就下降了可發(fā)生信號的抗體非特異結(jié)合的機(jī)遇。ELISA試劑盒現(xiàn)在主要有兩種類型的關(guān)閉液：蛋白和非離子型去污劑。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。假定您一向被布景標(biāo)題所困擾，那么或許您該花些時間來優(yōu)化關(guān)閉液。
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