對(duì)于血清、腹水和組織培養(yǎng)上清的澄清,離心和過(guò)濾是基本的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。這些技術(shù)可以去除會(huì)阻塞層析柱的脂類和小顆粒物質(zhì)。對(duì)于某些 樣品,緩沖液置換和除鹽也是必要的步驟。硫酸銨沉淀作為更進(jìn)一步的預(yù)處理步驟,經(jīng)常用于濃縮腹水中的免疫球蛋白。
抗血清
多克隆抗體通常是未經(jīng)純化的,稱為血清或抗血清。抗血清是指已經(jīng)除去了凝血蛋白和血紅細(xì)胞的免疫宿主的血液。抗血清包含所有種類的 抗體/免疫球蛋白以及其它血清蛋白。它所包含的不僅有識(shí)別靶抗原的抗體,還有識(shí)別非靶抗原的抗體,在免疫分析中有時(shí)會(huì)發(fā)生非特異性反 應(yīng)。由于這個(gè)原因,粗制抗血清通常要進(jìn)行純化,以去除血清蛋白,增加能特異和靶抗原相結(jié)合的免疫球蛋白的比例。
組織培養(yǎng)上清
單克隆抗體可以通過(guò)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)(細(xì)胞分泌性抗體)并收獲雜交瘤組織培養(yǎng)上清來(lái)獲得。
腹水
單克隆抗體可以通過(guò)在小鼠(或大鼠)的腹腔中生長(zhǎng)雜交瘤細(xì)胞而產(chǎn)生。雜交瘤細(xì)胞注射入小鼠以后,就會(huì)在小鼠腹腔繁殖并產(chǎn)生液體(腹 水)。這種腹水就包含了高濃度的可收獲抗體,比雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)有更高的抗體產(chǎn)量。
抗體純化
多克隆抗血清或單克隆腹水/組織培養(yǎng)上清通常通過(guò)下述三種方法中的一種來(lái)進(jìn)行純化:
1. 蛋白A/G純化 蛋白 A/G 純化是應(yīng)用金葡萄球菌的蛋白 A 或鏈球菌的蛋白 G 對(duì)免疫球蛋白 Fc 段的高親和性。蛋白 A/G 純化從粗制抗血清中去除了血清 蛋白,但沒(méi)有去除非特異的免疫球蛋白組分。結(jié)果蛋白 A/G 純化的抗血清仍然具有一小部分不期待的交叉反應(yīng)性。
2. 親和純化 親和純化就是通過(guò)相似性分離某一特定蛋白或具有相似特征的一組蛋白。這種分離蛋白的技術(shù)是基于在蛋白和耦合于層析介質(zhì)上的特定配基 之間的一種可逆的相互作用。 抗原親和純化的優(yōu)勢(shì)是免疫球蛋白能夠特異性地同刺激它產(chǎn)生的抗原進(jìn)行結(jié)合,結(jié)果消除了大量的非特異免疫球蛋白成分,將能特異與靶抗 原相結(jié)合的免疫球蛋白成分富集。因此親和純化后獲得的主要是含所期待的特異性免疫球蛋白。
3. 預(yù)吸附 多克隆抗體有時(shí)要經(jīng)過(guò)預(yù)吸附。也就是說(shuō)它們要被不同物種來(lái)源的其它蛋白或血清吸附,以消除可能的交叉反應(yīng)的抗體。這樣純化后的抗體 純度和特異性應(yīng)很高,任何交叉反應(yīng)都被顯著減少。
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