今天晶抗生物為科研朋友介紹ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)樣本處理方法的介紹。
一、血清
對(duì)于血清樣本的處理，都是離心取上清液待檢，在做預(yù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，血清樣本稀釋5倍直接進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
二、血漿
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
三、尿液
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
四、糞便樣本的處理方法
對(duì)于糞便樣本的處理，一般要求采集干的糞便，稀的糞便不利于檢測(cè)(對(duì)樣本處理帶來(lái)難度，也會(huì)使準(zhǔn)確性降低)。
糞便樣本處理如下：
① 收集：直接用醫(yī)院臨床收集糞便的耗材進(jìn)行收集；
② 采樣：一般選取的重量不能低于50mg，以1g為基準(zhǔn)。稱取1g加9ml的PBS(磷酸鹽緩沖液，PH控制在7.2-7.4，濃度為0.01mol/L)換算成勻漿的比例就是10%；
③ 保存：勻漿后的樣本如果采樣周期在1周之內(nèi)，可以保存在2-8℃，如果取樣周期在一個(gè)禮拜以上一個(gè)月以內(nèi)，-20℃保存。如果取樣周期超過(guò)1個(gè)月，保存在-80冰箱！低溫保存的話，盡量避免反復(fù)凍融。
五、組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
植物組織的提取，不管是根莖組織還是葉片組織還是果實(shí)組織，都應(yīng)該采用鮮重的計(jì)重方式，一般要遵循以下原則：
① 稱取的組織重量不能低于50mg。
② 勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS(PH=7.2-7.4)
③ 組織在勻漿器勻漿過(guò)程中，勻漿液應(yīng)該分2次加進(jìn)去，這樣勻漿更充分。
④ 充分勻漿完成后離心取上清，離心機(jī)的轉(zhuǎn)數(shù)選取2000-3000轉(zhuǎn)每分，轉(zhuǎn)數(shù)不宜超過(guò)5000.離心時(shí)間為15-30分鐘。
六、細(xì)胞培養(yǎng)上清
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
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