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一、實驗前將所有試劑平衡至室溫，包括樣本、TMB(非常重要)。

二、強烈建議老師在操作ELISA試劑盒的時候每個樣本包括標準品做復孔(請務必這樣操作)，因為這樣可以,求平均值，確保實驗結果的準確性對試劑盒的性能進行評估對自己的操作進行評估解決跳孔。

三、為保證老師ELISA試劑盒實驗結果準確 ，其中幾點重要的操作注意事項請務必參考：

如果以下表述與說明書中不一致，請按照實驗對應說明書的要求操作 。

1、標準品溶解：標準品溶解嚴格按照說明書進行操作，建議老師進行標準品稀釋時，在EP管中進行。

2、孵育：說明書中進行孵育的時候，一定要用微孔板振蕩器振蕩，這個很重要，利于抗原抗體充分結合。

3、洗板：建議按照說明書操作，每次洗滌至少洗液浸泡30s，重復6次，洗板時間太短、次數太少會導致實驗效果 不佳，延長洗板時間和增加洗板次數可以使背景更干凈。

四、如何控制標曲顯色(僅針對雙抗夾心法ELISA試劑盒)5 - 30分鐘顯色時間為經驗范圍，每個具體的實驗，可根據以下情況，確定大致的顯色時間：

1) 肉眼觀察：標曲S5孔有淡藍色、Blank孔無明顯藍色時，即可終止。

2) 儀器判斷：630 nm左右波長下，標曲S1孔的OD值達到0.5 - 0.7、S5孔的OD值達到0.05 - 0.08、Blank孔的OD 值小于0.05時，即可終止。

3) 高敏系列試劑盒因靈敏度更高，需嚴格控制顯色時長，可較普通試劑盒適當縮短顯色時間。